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            Super Fluor 488

            更新時(shí)間:2019-05-14

            簡(jiǎn)要描述:

            Super Fluor 488
            本公司是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè),專業(yè)提供分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生命科學(xué)基礎(chǔ)研究以及臨床檢測(cè)等諸多領(lǐng)域的試劑、耗材、儀器等各類產(chǎn)品及生物技術(shù)服務(wù)。

            Super Fluor 488

            Super Fluor 488

            5 mg¥3,095
            25 mg¥6,200

            一.實(shí)驗(yàn)步驟

            1.1 蛋白溶解:用0.1 M NaHCO3 溶解至終濃度為2mg/mL 

            將1mL 去離子水加入84mg NaHCO3 瓶中,配成1M 的碳酸氫鈉溶液。振蕩或吹打至*溶解。該溶液pH 約8.3,2~6℃保存可用2個(gè)星期;若抗體是溶液,將抗體稀釋至2mg/mL,再加入1/10 體積的上述碳酸氫鈉溶液;若抗體是凍干粉,將1M 碳酸氫鈉溶液用10 倍去離子水稀釋成0.1M 后,用其將抗體溶成2mg/mL 的溶液。

            1.2 染料溶解:染料固體粉末從冰箱放入干燥器中慢慢升至常溫后,用無(wú)水DMSO將染料配置濃度為1 mg/mL。

            1.3 標(biāo)記:在1mL蛋白溶液中緩慢加入適量染料溶液,(蛋白:染料摩爾比=1:20~50;質(zhì)量比可在以下范圍內(nèi)優(yōu)化 10~200ug Super dye每毫克IgG抗體)。同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌1小時(shí)。也可以直接將蛋白溶液直接加入染料的固體粉末的試劑瓶中,同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌1小時(shí)。

            1.4 純化:選擇下面三種方式純化后,產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM 溶液中,-20℃避光儲(chǔ)存。

            1.4.1 透析法:

            1)簡(jiǎn)單純化可用100 mL 0.15 M NaCl 溶液常溫避光透析4次,每次4小時(shí)除去未標(biāo)記上的染料。 

            2)在4°C用新鮮的1 L 0.15 M NaCl 溶液再避光透析過(guò)夜。  

            3)用100 mL 0.01 M PBS/ 0.01% 溶液常溫避光透析4小時(shí), 在4°C常溫避光再次透析過(guò)夜。 

            4)用0.22 μm注射器過(guò)濾頭過(guò)濾抗體溶液。

            1.4.2 P-30柱子

            1)0.5g p-30凝膠加入9mLPBS(pH=7.4)室溫過(guò)夜放置;次日,棄上清;真空抽濾5min。

            2)加入9mLPBS,輕柔震蕩均勻,放置20min后,去除上清液。

            3)再重復(fù)2)。

            4)將樹脂柱放入一個(gè)13×100mm 的玻璃管柱中,每個(gè)柱子加入1.5mL(不要多加),填的要均勻不能有氣泡。具體方法是:攪動(dòng)純化樹脂(組分C),加入1.0mL 懸浮液至空柱中靜置;全部下沉后再加入0.5mL樹脂至床體積為~1.5mL蓋上蓋子,可以室溫保存。

            5) 將樹脂柱上下端的口打開,放入10mL離心管中由于重力水自然流下,用垂直轉(zhuǎn)子1100g 離心3min,rpm 與相對(duì)離心力g 的換算公式如下:相對(duì)離心力g=(1.12×10-5)(rpm)2(半徑cm);離心后靜置待緩沖液全部流出,棄去緩沖液,保留收集管(若沒有垂直轉(zhuǎn)子,角轉(zhuǎn)子也可)。

            6) 換上干凈的離心管,將標(biāo)記的蛋白反應(yīng)液200μL逐滴加入樹脂柱的中心部位,使溶液被吸入膠床中;

            7) 將樹脂柱放入空的收集管中,1100g 離心5min;

            8)離心后,收集管內(nèi)是標(biāo)記好的蛋白,溶在100μLPBS 中,pH7.2,包括2mM 的疊氮鈉。未結(jié)合的染料保留在柱中,棄去樹脂柱。

            注意事項(xiàng):配置柱子時(shí),用較細(xì)的小瓶,每個(gè)小瓶配置2個(gè)柱子。便于去除水分。填柱子時(shí),加到1.5mL,盡量不要多加,離心時(shí)間按照說(shuō)明書1000g/3min,不要隨便更改。

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