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            ATP含量試劑盒

            更新時間:2024-06-20

            簡要描述:

            ATP含量試劑盒
            三磷酸腺苷(ATP)是生物體內能量轉換最基本的載體,是生物體內最直接的能量來源, 測定 ATP 含量并且計算能荷

            ATP含量試劑盒

            ATP含量試劑盒

            本試劑盒僅供科研使用 1 ATP 含量(磷鉬酸比色法)測定試劑盒說明書 (貨號:WS5180F 分光法 48 樣) 一、產品簡介: 三磷酸腺苷(ATP)是生物體內能量轉換最基本的載體,是生物體內最直接的能量來源, 測定 ATP 含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態。 肌酸激酶催化三磷酸腺苷(ATP)和肌酸生成磷酸肌酸,用磷鉬酸比色法進行檢測, 經波長掃描產物在 700nm 處有吸收峰,進而計算得到 ATP 的含量。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 提取液 A 30mL×1 提取液 B 5mL×1 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×2 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉體落入底部,每支 再加入 1.5mL 蒸餾水充分溶解待用;用不 完試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。 試劑二 液體 12mL×1 4℃保存 試劑三 粉劑μg×2 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉體落入底部,再加 1mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試 劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。 試劑四 粉劑 mg×2 4℃保存 用前甩幾下使粉劑落入底部,每瓶依次加 4.3mL 水,再1.7mL 濃硫酸加濃 硫酸時務必小心,逐滴緩慢加入水中,注 意防護)。 試劑五 液體 60mL×1 4℃保存 標準液 粉體 mg×1 -20℃保存 用前準確稱取 2mg 粉體即 ATP 至一新 EP 管中,再加 1.7mL 蒸餾水溶解即 2μmoL/mL,再用水稀釋一倍成 1μmoL/mL 標準品,待用(-20℃保存,一周內用完)【注】:全程操作需無磷環境;試劑配置用新的槍頭和玻璃移液器等,也可以用一次性塑料器皿, 避免磷污染。 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、水浴鍋、可調式移液槍、研缽。 四、ATP 含量檢測: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取約 0.1g 組織加入研缽中,加 0.5mL 提取液 A 進行勻漿,轉至 EP 管中,于 12000rpm,室溫離心 10min,取出 250μL 上清液至一新 EP 管中,再加入適量提取液 B 調 PH 至中性(用 PH 試紙測量,PH 6.5-8 之間均可)。再加蒸餾水定容至 0.5mL該液體待測備用。 【注】:也可以按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例提取。 ② 細菌/真菌樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心棄上清;取500萬細菌或細胞至研缽中,加0.5mL本試劑盒僅供科研使用 2 提取液 A 進行勻漿,低溫超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次),于 12000rpm,室溫離心 10min,取出 250μL 上清液至一新 EP 管中, 再加入適量提取液 B 調 PH 至中性(用 PH 試紙測量,PH 6.5-8 之間均可)。再加蒸 餾水定容至 0.5mL,該液體待測備用。 【注】:也可按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 ③ 液體樣本: 澄清樣本直接檢測,若渾濁則 12000rpm4℃離心 5min 后取上清液測定。 【注】:也可以按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)15~10 的比例提取。 2、上機檢測① 可見分光光度計預熱 30 min 以上,調節波長到 700nm,蒸餾水調零。 反應液配制:按照試劑四:試劑五=15 的比例混勻。用多少配多少的混合液。 ③ 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL) 測定管 對照管 標準管 (僅做一次) 空白管 (僅做一次) 樣本 50 50 標準液 50 試劑一 50 50 試劑二 100 100 100 100 試劑三 30 30 蒸餾水 80 130 充分混勻,37℃準確水浴 30min 反應液 480 480 480 480 混勻,37℃水浴 20min,液體全部轉移至 1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm中,在 700nm 下讀取各管吸光值 A(每個測定管需設一個對照管)。 【注】若 A 測定-A 對照的值小于 0.01,可增加取樣質量 W(如增至 0.2g)或增加樣本加 樣量 V1(如由 50μL 增至 100μL,則試劑二相應減少);標準管仍為 50μL,其他試 劑不變;則改變后的 W V1 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算: 1、按樣本鮮重計算: ATP 含量(μmol/g 鮮重)=[C 標準×V ×(A 測定-A 對照)÷(A 標準-A 空白)]÷(W×V1÷V) =(A 測定-A 對照)÷(A 標準-A 空白)÷W 2、按細菌/細胞密度計算: ATP 含量(nmol/104 cell)=[C 標準×V ×(A 測定-A 對照)÷(A 標準-A 空白)]÷(500×V1÷V) =2×(A 測定-A 對照)÷(A 標準-A 空白) 3、液體中 ATP 含量計算: ATP 含量(μmol/mL)=[C 標準×V ×(A 測定-A 對照)÷(A 標準-A 空白)]÷V1 =(A 測定-A 對照)÷(A 標準-A 空白) C 標準---標準液濃度,1μmol/mLV---加入提取液體積,1mLV1---加入反應體系中樣本體積,0.05mLV ---標準品加樣體積,0.05mLW---樣本質量,g500---細胞或細菌總數,萬。


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